| ||||
|
|
转基因鱼构建 构建转基因鱼是一个复杂而科技含量较高的技术，主要包括以下几个方面： 1.目的基因的获得 首先从基因文库中得到一个含侧翼调控序列的合适的目的基因。侧翼调控序列包括位于基因编码序列上游的启动子及位于编码序列上游和下游的组织特异性增强子。 2.基因克隆 获得的基因序列必须克隆到质粒或噬菌体中，并在合适的菌种中扩增。然后从培养的细菌中提取这种质粒或噬菌体DNA，用合适的限制性内切酶酶切分离出插入载体的外源基因序列。通过电泳分析，确定分离的DNA片段的分子量，以证实所分离的序列是我们所需的基因片段。 3.受体鱼（受精卵）的获得 在鱼类繁殖季节，选取成熟的雌、雄鱼，注射垂体或激素催产，分别收集精液和卵子，干法受精。受精卵去膜，将裸卵移至Holtfreter 溶液中，选取质好的裸卵移质手术杯中作基因转移。 4.注射基因 目前有几种将外源基因导入鱼卵的方法：显微注射法、电穿孔法、精子载体法和基因枪法。 5.不论用何种方法注射了DNA的鱼卵，其处理方法与通常一样。 （1）必须保留与注射DNA的鱼卵同一批次的鱼卵作为对照，以便比较转基因实验各步骤中的成活率。鱼卵孵化后，需考虑的问题是，杀死部分幼鱼作为提取DNA的样品用于转基因的检测，还是等幼鱼长大后进行活体采样用于检测。大多数实验室同时采用上述两种方法。 （2）区别完全的转基因鱼与嵌合体转基因鱼 如果外源基因在受精卵分裂后某阶段才整合入受体基因组中，则肯定那些从整合了外源基因的细胞发育而来的组织才含有外源基因序列。这种仅在部分组织中整合有外源基因的动物称为嵌合体。
|
| ||
